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上海天根生物技术有限公司(北京天根生物技术有限公司)

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请问国内哪些生物试剂销售公司做的比较好呢?

大致有生工生物,fermantas,杭州兰堡生物,天根,宝生物等等。

我想做生物科技方面的销售,目前在中国的市场是个空白。。。问下做这个可以吗?以后的发展前途怎么样?

这个方面已经有很多人在做了。在北京上海这不是什么空白,而是过饱和。

如果满足供应商(有国内的也有国外的)的条件,你可以代理许多相关产品。你也可以直接为这些公司做销售人员。

举例:国外的公司:NEB(最大的限制性内切酶供应商),MBI(第二大限制性内切酶供应商),AB(生命科学类),通用电气(真的是什么都做,不限于生命科学),invitrogen(试剂类),ROCHE(试剂类),TAKARA(试剂类,日本独资公司,总部却在大连),AXYGEN(耗材类)……

国内的公司:天根(德国全资子公司,北京,基础试剂类),全式金(基础试剂类),百泰克(基础试剂类),振泰(园艺用品类),还有无数代理上述国内外产品的代理公司(如中原领先、六合通、茂建联星……),还有无数无数的杂牌厂家生产耗材类的……

综上所述,如果你想做自主品牌的话……建议你慎重考虑,慎重考虑。

真核生物(如小鼠)的质粒如何提取,请写下详细步骤,谢谢

对于小鼠来说,质粒只存在于线粒体中

质粒提取可分为三个部分

1 裂解细胞

2 质粒DNA与染色体DNA的分离

3 纯化

这里找到一篇论文:

小鼠CD40Ig基因真核表达质粒的构建及鉴定

1 材料和方法

1.1 实验动物 Balb-c小鼠,6周龄, 雌性, 购自北京大学医学院实验动物部。

1.2 质粒、菌株、细胞株和主要试剂 质粒pEGFP-N1、pGEM-T载体质粒、E coli.DH5a(天根公司)。低代次HEK293细胞株(本元正阳)。AdMaxTM Kit E试剂盒(Microbix Biosystems,Inc.)。Taq酶、T4 DNA连接酶(Takara公司)。限制性核酸内切酶XmaⅠ、Bgl II、Hind III(Biolabs)。Trizol 试剂、Lipofectamine 2000(Invitrogen)。逆转录试剂盒、PCR Master Mix(MBI)。质粒提取、胶纯化试剂盒(QIAGEN)。DMEM高糖培养基、胎牛血清、胰酶(Gibco)。引物合成由上海生工公司完成,基因测序由北京诺塞基因研究中心有限公司完成。

1.3 构建小鼠CD40Ig基因真核表达质粒

1.3.1 小鼠脾脏总RNA的提取:将小鼠以颈椎脱臼法处死,取出脾脏,加入液氮研磨后,用Trizol试剂提取总RNA,方法按产品说明进行。

1.3.2 CD40、IgG2a Fc、GFP基因的制备:以小鼠脾脏总RNA为模板,oligo-dT为引物,RT-PCR合成cDNA,再以此cDNA为模板,用CD40和mIgG Fc特异引物进行PCR扩增,另以pEGFP-N1质粒为模板进行PCR扩增,引物及PCR反应条件见表1,分别获得CD40、mIgG2a Fc和GFP基因。

1.3.3 质粒pGEM-IgG的构建:将IgG Fc的PCR产物与pGEM-T质粒进行TA连接反应,即10μl PCR产物加2μl的pGEM-T载体加10 U的T4连接酶,16 ℃过夜。取2μl的连接产物以氯化钙法转化大肠杆菌DH5α,用蓝白斑方法挑选含氨苄青霉素抗性的白斑克隆,在3 ml LB培养基(含氨苄青霉素100 μg/ml)中37 ℃、80 r/min振荡培养过夜,提取质粒pGEM-IgG并测序。

1.3.4 质粒p516-IgG的构建:用Bgl II分别消化pGEM-IgG和pDC516,产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳后进行胶纯化。将IgG片段和pDC516线性载体按7:1的摩尔浓度比例加T4连接酶16 ℃过夜进行连接反应。取5μl连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,用pDC516-f和mIgG-r引物组合进行菌落PCR筛选正向插入的重组子(见表2),将PCR阳性的重组子进行细菌培养,提取质粒并测序。

1.3.5 质粒p516-CD40-IgG融合基因的构建:用Xma I分别消化CD40的PCR产物和p516-IgG,将CD40片段和pDC516-IgG 线性载体进行连接(方法同上)。转化大肠杆菌DH5α后,用pDC516-f和CD40-r引物组合进行菌落PCR筛选(见表2),将阳性结果的重组子进行细菌培养,提取质粒并测序。

1.3.6 PDC516-CD40-IgG-GFP质粒的构建:用Hind Ⅲ分别消化GFP的PCR产物和pDC516-CD40-IgG,将GFP片段和pDC516-CD-IgG 线性载体进行连接反应(方法同上),用GFP-f和pDC516-r引物组合进行菌落PCR筛选正向插入的重组子(见表2),提取质粒并测序。

1.3.7 PDC516-CD40-IgG-GFP质粒的大量制备:按QIAGEN EndoFree Plasmid Purification试剂盒说明进行制备,产物经1%琼脂糖凝胶电泳证实(见图2),紫外分光光度仪测OD值,过滤除菌后-20 ℃保存备用。

1.3.8 重组质粒转染293细胞:在6孔板中将2.0×105个细胞接种于2 ml含血清不含抗生素的DMEM中,在5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h,使细胞在转染时铺满平板的60%~70%。用Lipofectamine 2000转染试剂介导重组质粒转染,在无菌EP管中准备A、B两种溶液。A液:将4.0μg DNA溶于250μl无血清DMEM中,轻轻混匀;B液:将10μl Lipofectamine 2 000溶于250μl无血清培养液中,轻轻混匀,室温孵育5 min。将A液和B液混合并混匀,室温孵育20 min,以形成脂质体/DNA复合物。换去6孔板中旧的培养液,重新加入2 ml含血清不含抗生素的DMEM,逐滴加入500μl脂质体/DNA复合物。在5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h后换液。

2 结果

2.1 获得小鼠CD40胞外区、IgG2a Fc段及GFP基因 引物CD40-f和CD40-r经PCR扩增的小鼠CD40胞外区基因片段为572 bp;引物mIgG-f和mIgG-r经PCR扩增的小鼠IgG2a Fc段为700 bp;引物GFP-f和GFP-r经PCR扩增的GFP基因片段为765 bp。琼脂糖凝胶电泳结果见图1。

2.2 pDC516-CD40-IgG-GFP真核表达质粒的成功构建

2.2.1 pDC516-IgG的构建:pGEM-T载体为3 000 bp的质粒,构建的pGEM-IgG质粒为3 700 bp。pGEM-T质粒的多克隆位点上游110 bp处含有T7 Primer序列,用T7+mIgG-r引物组合可扩增出约810 bp的片段,用T7 primer测序证实IgG序列的正确性。将IgG片段和pDC516线性载体进行连接反应,用pDC516-f测序证实IgG插入序列的正确性(见图3)。

2.2.2 pDC516-CD40-IgG的构建:将CD40片段和pDC516-IgG线性载体进行连接反应,用引物pDC516-f测序证实CD40插入序列的正确性。

2.2.3 pDC516-CD40-IgG-GFP质粒的构建:将GFP片段和pDC516-CD40-IgG 线性载体进行连接反应,用pDC516-r测序证实GFP插入序列的正确性。CD40-IgG-GFP含酶切位点的融合产物为2001bp,编码667aa(见图4)。

2.3 重组质粒在真核细胞内表达 pDC516-CD40-IgG-GFP质粒抽提后在紫外分光光度计下检测到OD值为0.1257。将该质粒用Lipofectamine 2000转染293细胞的第4天开始可见零星的细胞上有GFP表达,随着时间的延长,GFP表达的细胞量逐渐增多,第7天左右在荧光显微镜下见大量的细胞有绿色荧光发生(见图5)。

参考资料:

国产生物试剂什么品牌好

看具体是什么类型的试剂,总的来看天根生化、同科生物都可以的,性价比高。。

国内哪家测序公司比较好,以前送过一段时间上海生工,但有些时候反向总测不出来,请推荐下

北京主要测序公司如下:天根生化、奥科、华大基因、三博远志、博迈德、清华、这些价格可以接受且质量说的过去。英俊比较好但是价格比较高.可以结合实际经费进行选择.当然也有一些其他小的公司。小的公司一般服务好。大的公司质量好但是由于样品量大处理起来有一定困难个别细节可能主要不到造成服务欠佳.注:反向测序取消如果是通用引物一般为测序原因。如果是自带引物就不大好说。建议您在结果不理想或者存在疑问的情况下电话或者邮件咨询测序公司。一般量大的公司不可能个个联系客户说明取消原因只是给笼统的理由。

比较大的生物公司有哪些

生物也分很多种的:比如专业做内切酶的 宝生物、MBI..........;专业做基因的 华大基因.......;专业做试剂的 国药集团化学试剂有限公司、amresco.......专业做分子生物学试剂盒的 天根生化科技、爱思进生物...... 还有其他的许多分类,具体要看你需要的是哪一类型的了!

  • 评论列表:
  •  南殷听弧
     发布于 2023-02-03 20:55:04  回复该评论
  • n试剂盒说明进行制备,产物经1%琼脂糖凝胶电泳证实(见图2),紫外分光光度仪测OD值,过滤除菌后-20 ℃保存备用。 1.3.8 重组质粒转染293细胞:在6孔板中将2.0×105个细胞接种于2 ml含血清不含抗生素的DMEM中,在5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h,使细
  •  森槿饮惑
     发布于 2023-02-03 11:18:30  回复该评论
  • 质体/DNA复合物。在5% CO2、37 ℃培养箱中培养24 h后换液。 2 结果 2.1 获得小鼠CD40胞外区、IgG2a Fc段及GFP基因 引物CD40-f和CD4
  •  弦久蔚落
     发布于 2023-02-03 19:32:58  回复该评论
  • 1.3.5 质粒p516-CD40-IgG融合基因的构建:用Xma I分别消化CD40的PCR产物和p516-IgG,将CD40片段和pDC516-IgG 线性载体进行连接(方法同上)。转化大肠杆菌DH5α后,用pDC516-f和CD40-
  •  颜于零栀
     发布于 2023-02-03 20:20:47  回复该评论
  • 杭州兰堡生物,天根,宝生物等等。我想做生物科技方面的销售,目前在中国的市场是个空白。。。问下做这个可以吗?以后的发展前途怎么样?这个方面已经有很多人在做了。在北京上海这不是什么空白,而是过饱和。 如果满足供应商(

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